本发明公开了一种以氨基苯并咪唑为功能配基的层析介质及其制备方法。以亲水性多孔微球为层析基质，采用烯丙基溴活化，偶联氨基苯并咪唑，得到以氨基苯并咪唑为功能配基的介质。层析基质中依次加入二甲基亚砜和烯丙基溴进行活化；活化的层析基质和N-溴代丁二酰亚胺反应，进行溴代醇化；将溴代醇化后的层析基质与氨基苯并咪唑溶液混合，偶联氨基苯并咪唑配基；最后采用乙醇胺水溶液对未反应的溴代醇化末端进行封闭，得到以氨基苯并咪唑为功能基团的疏水性电荷诱导层析介质。本发明的新型层析介质制备过程简便，抗体吸附容量高，具有非盐依赖吸附的特性，通过改变溶液pH至弱酸性即可实现解吸和回收，可以用于疏水性电荷诱导层析分离抗体。