一种液相色谱串联质谱方法在大规模吸烟人群样本生物监测3-甲基腺嘌呤的应用，包括以下具体过程：1）取样，招募吸烟者、非吸烟者志愿者，对志愿者进行筛选，采集志愿者尿液，2）逐一对志愿者尿液进行处理、测定，得到每一个志愿者尿液样品中3-甲基腺嘌呤的含量；3）将每一志愿者尿液样品的测定数据输入数据分析软件进行分析处理，找出吸烟者尿液中3-甲基腺嘌呤的含量规律。本发明通过对大规模志愿者的招募，大量尿液样品的保存条件及处理检测条件的优化，建立了分析、检测中国吸烟者尿液中3-甲基腺嘌呤的含量水平的应用方法，适合于分析大量的吸烟人群尿液中3-甲基腺嘌呤水平，为相应的样本生物监测研究提供了具体的数据支撑，具有十分重要意义。