本发明公开了丙型肝炎重组融合抗原及其表达基因和制备方法。所述的丙型肝炎重组融合抗原的氨基酸组成由SEQ ID NO.1所示氨基酸、第一连接子、SEQ ID NO.2所示氨基酸、第二连接子、SEQ ID NO.3所示氨基酸、第三连接子及SEQ ID NO.4所示氨基酸顺次组合构成，每个连接子分别由6个柔性分子量小的、极性且亲水的氨基酸构成。其制备方法包括：重组质粒pET41a‑Core‑NS3‑NS41‑NS42的构建；丙型肝炎重组融合抗原的表达和纯化。所述的丙型肝炎重组融合蛋白具有较高的灵敏度和特异性，可应用于生物医药领域，特别是应用在丙型肝炎抗体胶体金检测试纸条中。