本发明提供一种催化活力和热稳定性提高的真菌腈水解酶突变体及其构建方法，该突变体是由赤霉菌(Gibberella intermedia)CA3?1真菌腈水解酶基因出发，运用多轮定点饱和突变构建突变体库而筛选获得。本发明采用半理性设计的方法获取真菌腈水解酶突变体，其特征在于对真菌腈水解酶活性中心附近第128位Ile和第161位Asn进行了改造，获得的突变体分别为Ile128Leu、Asn161Gln以及Ile128Leu?Asn161Gln。本发明提供的突变体催化活力和热稳定性均得到了显著提高，改造后的真菌腈水解酶突变体可降低生产成本，提高生产效率，具有更高的应用价值。