本发明公开了一种孔雀石绿半抗原、人工抗原及其制备方法，保留孔雀石绿的特征结构，在孔雀石绿结构的不同化学位点衍生出具有不同电子云密度、不同碳链长度以及适合与大分子载体偶联的活性手臂。所述的活性手臂为带有末端为氨基或羧基的酰胺键。由隐色孔雀石绿半抗原制备得到孔雀石绿人工抗原，应用于检测隐色孔雀石绿和孔雀石绿的残留量时具有很高的特异性和灵敏度，准确度高，回收率高，同时方法简单，成本低廉，建立出快速、灵敏、经济、高效的孔雀石绿免疫检测方法。