一种适用于黄瓜花叶病毒不同亚组株系基因组的通用引物及扩增方法，即提供一套能够用于烟草CMV检测，特别是用于烟草CMV所有亚组株系全基因组扩增的通用引物，本发明还还提供利用该套引物扩增侵染烟草黄瓜花叶病毒不同亚组株系基因组扩增和检测CMV的一步法RT-PCR方法。本发明的有益效果是，只需一套引物，就能扩增得到CMV不同亚组株系基因组全序列和进行CMV病毒病检测。结合一步法RT-PCR方法，能够大大缩短CMV基因组扩增和CMV病毒病检测时间。该套引物通用性强，扩增产物单一，一步法RT-PCR扩增方法简单、快速、高效，使用该套引物和方法能够有效促进CMV基因组的研究工作，加快研究进程。