药物诱导的亚细胞结构疫苗及其制备方法，在肿瘤原代细胞分裂过程中以蛋白酶体抑制剂诱导，肿瘤细胞内部产生的一些易降解蛋白进入自噬途径，产生的自噬小体不被溶酶体降解，最终形成直径为200-900nm的亚细胞结构，即为小体疫苗。本发明的抗肿瘤的亚细胞结构疫苗是基于以蛋白酶体抑制剂及氯化铵诱导肿瘤原代细胞内短寿蛋白和缺损的核糖体产物作为抗原蛋白通过自噬途径进入双层膜结构的自噬小体中，这样包裹抗原的自噬小体即为本发明的亚细胞结构疫苗。该疫苗经淋巴结给药可以有效诱发机体免疫系统的交叉递呈，激活CD4+、CD8+T淋巴细胞及CTL细胞，杀伤肿瘤细胞。