一种L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的制备方法，包括以下步骤：将一元醇加入反应釜中，再向反应釜中加入L-谷氨酸，冷却至0-5℃，加入强酸作为催化剂进行酯化反应，得到白色固体；向另一反应釜中加入乙酸乙酯和白色固体，再滴加与L-谷氨酸同摩尔量的D-ɑ-氯丙酰氯，同时滴加强碱弱酸盐,得到油状物；将油状物加入油状物浓氨水中，得到L-丙氨酰-L-谷氨酰胺。本发明反应原料易获得为L-谷氨酸，且价格便宜，有效降低生产成本，利于推广应用，能够实现规模化生产；每一步的收率大于90%，总收率大于80%，收率较高；反应原料种类少，操作简单，利于生产；本发明还具有反应温度在0-5摄氏度，无需保护气体，反应条件要求低等优点。