用于负压条件下的色谱分离柱，包括玻璃管，所述玻璃管的一端自上而下依次设有上管接头、真空塞、上真空螺帽和上真空螺母，所述上管接头与真空塞密封连接，真空塞与上真空螺帽之间通过“鞘”型面接触，上真空螺帽与上真空螺母之间设有密封圈，该密封圈套于玻璃管上；玻璃管的另一端自上而下依次设有下真空螺母、下真空螺帽和下管接头，下真空螺帽与下管接头密封连接，下真空螺帽与下真空螺母之间设有密封圈，该密封圈设于玻璃管上，下真空螺帽内设有筛板。本发明结构合理，使用方便，对色谱分离柱密封材料及其机械加工精度的要求相对较低，将大大降低其成本，是负压系统条件下使用的理想色谱分离柱。