本发明提供了一种AV/BV联合检测试剂盒，由反应装置、样品稀释液、显色剂A和显色剂B组成，其中反应装置上设置有过氧化氢反应孔、唾液酸苷酶反应孔、白细胞酯酶反应孔、β-葡萄糖醛酸酶反应孔和凝固酶反应孔，反应孔中有相应的反应垫。本发明还提供了该检测试剂盒的制备方法。本发明的检测试剂盒通过对过氧化氢的测定以及对唾液酸苷酶、白细胞酯酶、β葡萄糖醛酸酶和凝固酶的活性的测定，从而直接鉴定出阴道分泌物中的需氧菌/厌氧菌和兼性厌氧菌等菌群，该方法操作简便快速，准确性高，适于临床常规特别是医院门诊的使用。