本发明公开了一种从表达重组人血清白蛋白-干扰素α2b融合蛋白的毕赤酵母发酵液中纯化rHSA-IFNα2b的生产方法，该方法将整合有人血清白蛋白-干扰素α2b融合蛋白基因的毕赤酵母工程菌高密度发酵表达，随后将含有rHSA-IFNα2b的发酵液通过亲和柱层析、疏水柱层析、离子交换柱层析和凝胶柱层析顺序组合纯化，大规模制备得到高纯度的药用重组人血清白蛋白-干扰素α2b融合蛋白蛋白。本发明操作简单、方便、省时、有利于大规模的工业生产。