一种获取重组大肠杆菌中丙酮酸氧化酶的方法

    公开(公告)号:CN108795890A

    公开(公告)日:2018-11-13

    申请号:CN201810851942.9

    申请日:2018-07-30

    Inventor: 张建国 卢俊文

    CPC classification number: C12N9/0008 C12Y102/03003

    Abstract: 本发明提供一种获取重组大肠杆菌中丙酮酸氧化酶的方法,包括如下步骤:将含有丙酮酸氧化酶的表达基因的重组大肠杆菌pET28a‑pod接种至固体培养基上进行活化,得到活化的重组大肠杆菌pET28a‑pod;将活化的重组大肠杆菌pET28a‑pod接种至放于摇床上的LB培养基并进行摇动,得到活化的重组大肠杆菌pET28a‑pod的种子液;接种该种子液至TB培养基进行培养,培养至浓度为第一细胞浓度后加入诱导剂进行诱导,当浓度为第二细胞浓度后不断加入盐酸溶液进行发酵至pH值为5.5‑6.5,然后继续诱导,得到菌液I;取菌液I进行离心后倒去上清液,用PBS溶液洗涤两次后用等体积的PBS溶液进行重悬,得到重悬液;对重悬液进行超声破碎,得到超声破碎后的菌液II;取菌液II进行离心,收集含有丙酮酸氧化酶的上清液。

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