一种绵羊促卵泡激素基因重组表达制备方法

    公开(公告)号:CN108531508B

    公开(公告)日:2021-07-16

    申请号:CN201810230413.7

    申请日:2018-03-20

    Abstract: 本发明提供一种绵羊促卵泡激素基因重组表达制备方法,包括以下步骤:获取绵羊FSH‑αβ氨基酸序列,对其进行密码子优化,在上游依次添加了BamH I酶切位点、kozak序列和TG,下游添加了CTP序列和EcoRI酶切位点,得到重组FSH‑αβ,将其连接至载体上,得到pcDNA3.1‑FSHαβ;将pcDNA3.1‑FSHαβ在大肠杆菌中进行扩增,提取重组质粒;将重组质粒转染CHO‑K1‑S2全悬浮细胞,转染后,加入G418继续培养,收集细胞上清液。应用本发明的方法得到的FSH蛋白为分泌性表达,培养后CHO‑K1‑S2‑FSH细胞上清中检测到FSH的平均含量为87mIU/mL。

    一种绵羊促卵泡激素基因重组表达制备方法

    公开(公告)号:CN108531508A

    公开(公告)日:2018-09-14

    申请号:CN201810230413.7

    申请日:2018-03-20

    Abstract: 本发明提供一种绵羊促卵泡激素基因重组表达制备方法,包括以下步骤:获取绵羊FSH-αβ氨基酸序列,对其进行密码子优化,在上游依次添加了BamH I酶切位点、kozak序列和TG,下游添加了CTP序列和EcoRI酶切位点,得到重组FSH-αβ,将其连接至载体上,得到pcDNA3.1-FSHαβ;将pcDNA3.1-FSHαβ在大肠杆菌中进行扩增,提取重组质粒;将重组质粒转染CHO-K1-S2全悬浮细胞,转染后,加入G418继续培养,收集细胞上清液。应用本发明的方法得到的FSH蛋白为分泌性表达,培养后CHO-K1-S2-FSH细胞上清中检测到FSH的平均含量为87mIU/mL。

    无血清悬浮培养型MDCK细胞株及其应用

    公开(公告)号:CN109852579A

    公开(公告)日:2019-06-07

    申请号:CN201910237638.X

    申请日:2019-03-27

    Abstract: 本发明公开了一种无血清悬浮培养型MDCK细胞株及其应用,所述无血清悬浮培养型MDCK细胞株保藏于中国典型培养物保藏中心,分类命名:犬肾细胞MDCK-XF04,保藏编号为:CCTCC NO:C2018192;所述无血清悬浮培养型MDCK细胞株可应用于流感疫苗和禽流感疫苗的生产。本发明通过无血清适应培养和悬浮培养驯化,得到了无血清悬浮培养型MDCK-XF04细胞株,犬肾细胞MDCK-XF04细胞在无血清培养基悬浮培养活力高、结团少且均一性较好,完全适应在无血清培养基中进行悬浮培养,为我国开展流感和禽流感疫苗的相关研究和生产提供了无血清悬浮培养型细胞株。

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