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公开(公告)号：CN112322512A
公开(公告)日：2021-02-05
申请号：CN201910717181.2
申请日：2019-08-05
Applicant: 浙江大学
IPC: C12N1/19 , C12N15/113 , C12N15/90 , C12P19/40 , C12R1/865
Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR技术改造酿酒酵母利用DL‑蛋氨酸合成S‑腺苷蛋氨酸的方法及应用：在二倍体工业酿酒酵母中构建了一种基于CRISPR/Cas9技术的基因敲入，基因敲除和Delta位点整合等基因组改造方法；进一步的利用该方法对该酵母菌株HPA3基因位点敲入DAAO与L‑PheDH表达框，SAH1基因位点敲入DAAO与L‑PheDH表达框，SPE2基因位点敲入SAM2基因表达框，GLC3基因位点敲入SAM2基因表达框，获得的工程菌利用DL‑蛋氨酸合成S‑腺苷蛋氨酸的能力得到显著提高。
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公开(公告)号：CN112301050A
公开(公告)日：2021-02-02
申请号：CN201910680780.1
申请日：2019-07-26
Applicant: 浙江大学
Abstract: 一种构建高产谷胱甘肽重组菌株的方法与应用，属于生物工程领域。本发明提供的高产谷胱甘肽的重组菌株方法的特征在于：以自身大量合成谷氨酸的谷氨酸棒杆菌为出发菌株，引入来源无乳链球菌的gshF基因或来源大肠杆菌的gshA和gshB基因赋予谷胱甘肽合成能力；进一步基因组缺失基因aceD，mcbR和sdaA；同时表达截短的serA基因，pgk基因，来源大肠杆菌的cysE基因和cysK基因，来源拟南芥的cysE基因，强化半胱氨酸途径；鉴于谷氨酸棒杆菌株自身可以合成大量谷氨酸，半胱氨酸途径已被强化，获得的工程菌发酵过程中仅需添加甘氨酸即可高产谷胱甘肽。
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公开(公告)号：CN106084017B
公开(公告)日：2019-11-22
申请号：CN201610419991.6
申请日：2016-06-13
Applicant: 浙江大学
IPC: C07K14/245 , C12N15/31 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12R1/19
Abstract: 本发明提供一种大肠杆菌水通道蛋白AQPZ中整合非天然氨基酸pPpa的方法，包括：定点突变詹氏甲烷球菌的酪氨酸‑tRNA合成酶获得MjpPpaRS基因，将MjpPpaRS基因克隆到pIVEX2.4c质粒上，得到重组质粒pIVEX2.4c‑MjpPpaRS；将重组质粒pIVEX2.4c‑MjpPpaRS和pUC‑MjtRNA转化至大肠杆菌BL21，选取阳性转化子，发酵后制成大肠杆菌无细胞抽提物，建立无细胞表达体系；以pIVEX2.4c‑AqpZ为模板，对AQPZ的F10、F13和F17三个位点进行琥珀突变；向无细胞表达体系中添加去污剂可溶表达编入pPpa的AQPZ蛋白，利用亲和层析纯化获得定点编入pPpa的AQPZ蛋白。本发明利用大肠杆菌无细胞体系生产编入pPpa的AQPZ蛋白并利用亲和层析纯化获得该目标蛋白，非天然氨基酸的嵌入使得该水通道蛋白与磷脂的亲和性增强，使得相同的条件下水通道蛋白的嵌入后更稳定。
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公开(公告)号：CN105483153B
公开(公告)日：2019-09-20
申请号：CN201510691925.X
申请日：2015-10-23
Applicant: 山东金城生物药业有限公司 , 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种酿酒酵母代谢工程改造提高S‑腺苷‑L‑蛋氨酸生产水平的方法：利用酵母基因敲除技术，将酿酒酵母染色体上编码腺苷蛋氨酸脱羧酶基因SPE2突变失活，得到SPE2突变菌株。与原始的酿酒酵母菌株相比，突变菌株积累SAM能力增强、生产SAM产量明显提高。特别是，在先敲除糖原支链酶基因GLC3得到酿酒酵母突变株基础上，进一步敲除再进行SPE2敲除，或者先敲除SPE2基因再敲除GLC3基因，对提高酿酒酵母菌株生产腺苷蛋氨酸产量有更明显的提高，可到达55.1%以上。
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公开(公告)号：CN104073459B
公开(公告)日：2017-05-24
申请号：CN201410311356.7
申请日：2014-07-02
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种提高大肠杆菌发酵生产番茄红素产量的方法，包括以下步骤：制备产番茄红素的大肠杆菌菌株，将大肠杆菌菌株中的野生型crp基因克隆到pKSC质粒上，得到重组载体pKSC‑crp，通过碱基替换：得到优化的重组载体pKSC‑crp1；最后用pKSC‑crp1中的crp1基因替换野生型crp基因，得到番茄红素高产量的菌株。本发明通过对大肠杆菌菌株中的野生型crp基因的碱基替换A26T，影响其所调控的各种基因的转录水平，调节番茄红素合成直至整个菌体的代谢网络，进而提高番茄红素在大肠杆菌中的合成能力。此方法能有效提高大肠杆菌合成番茄红素的能力，对利用大肠杆菌工业化生产番茄红素具有重要的意义。
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公开(公告)号：CN104073509A
公开(公告)日：2014-10-01
申请号：CN201410311102.5
申请日：2014-07-02
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开一种提高大肠杆菌乙醇耐受性的方法，包括以下步骤：将大肠杆菌菌株中的野生型fnr基因克隆到pKSC质粒上，得到重组载体pKSC-fnr，通过碱基替换，得到优化的重组载体pKSC-fnr1和pKSC-fnr2；最后用pKSC-fnr1和pKSC-fnr2中的fnr1和fnr2基因替换E.coliDH5α中野生型fnr基因，得到两个乙醇耐受性提高的菌株。本发明通过对大肠杆菌菌株中的野生型fnr基因的碱基替换，影响其与乙醇耐受性相关的基因，进而提高大肠杆菌中的乙醇耐受性。此方法能有效提高大肠杆菌的乙醇耐受性，对利用大肠杆菌用于工业化生产乙醇具有重要的意义。
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公开(公告)号：CN102559782B
公开(公告)日：2013-09-25
申请号：CN201210042829.9
申请日：2012-02-24
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开的利用酪丁酸梭菌发酵甘蔗渣水解液生产丁酸的工艺，步骤包括：将酪丁酸梭菌接种于种子培养基中，得到一级种子；取一级种子接种于种子培养基，得到二级种子作为发酵母种；将发酵母种接种于预发酵罐中经扩大培养后，将培养液泵入纤维床生物反应器内，维持循环，当游离的菌体浓度降为1.0-3.0g/L，将培养液更换为甘蔗渣水解液发酵培养基进行批次发酵、补料发酵或反复批次发酵，得到丁酸；本发明工艺简单，以甘蔗渣水解液为碳源，利用纤维床生物反应器进行固定化发酵，可以资源化利用甘蔗渣等农业废弃物，降低发酵法生产丁酸的成本，提高丁酸发酵产率和得率，同时可省去反复接种，并连续长期稳定运行，易于进行工业放大。
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公开(公告)号：CN103173468A
公开(公告)日：2013-06-26
申请号：CN201310074302.9
申请日：2013-03-08
Applicant: 浙江大学
IPC: C12N15/31 , C12N15/70 , C07K14/245 , C07K1/22
Abstract: 本发明公开了一种水通道蛋白AqpZ的制备方法，该方法首先扩增大肠杆菌水通道蛋白AqpZ-HIS，然后构建重组表达载体并构建及诱导表达工程菌株，超声波破碎得到的融合蛋白MBP-AqpZ-HIS的菌体，最后纯化得到水通道蛋白AqpZ；本发明实现了在大肠杆菌中高效表达麦芽糖结合蛋白-水通道蛋白AqpZ-多聚组氨酸二元标签融合蛋白，克服了传统超表达AqpZ对宿主细胞造成的毒性及形成不溶性包涵体问题；而且，通过本方法表达的水通道蛋白只需通过两轮的简单的亲和色谱分离就可以得到高纯度的水通道蛋白AqpZ，操作简单可适用于工业化生产。
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公开(公告)号：CN102220248B
公开(公告)日：2013-01-02
申请号：CN201110131566.4
申请日：2011-05-20
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开的产生聚苹果酸的菌株，是从植物叶片表面筛选得到的不产生黑色素的菌株，分类命名为出芽短梗霉，拉丁文学名为（Aureobasidiumpullulans）ZD-3D,该菌株保藏编号为CGMCCNo.4605。利用该菌株发酵生产聚苹果酸方法简单易行，有利于聚苹果酸的分离纯化，产量最高可达到50~60g/l。
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公开(公告)号：CN102220248A
公开(公告)日：2011-10-19
申请号：CN201110131566.4
申请日：2011-05-20
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开的产生聚苹果酸的菌株，是从植物叶片表面筛选得到的不产生黑色素的菌株，分类命名为出芽短梗霉，拉丁文学名为（Aureobasidium pullulans）ZD-3D,该菌株保藏编号为CGMCC No.4605。利用该菌株发酵生产聚苹果酸方法简单易行，有利于聚苹果酸的分离纯化，产量最高可达到50~60g/L。
