公开(公告)号：CN114774472B

公开(公告)日：2023-04-28

申请号：CN202210654192.2

申请日：2022-06-10

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 王静 ,  廖杨 ,  杨悦 ,  马定 ,  郭元柯 ,  唐意博 ,  许晟 ,  王昕 ,  陈可泉 ,  欧阳平凯

IPC: C12N15/90 ,  C12N15/70 ,  C12N15/60 ,  C12N15/31 ,  C12N1/21 ,  C12P13/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种耐受戊二胺的重组大肠杆菌构建及应用。通过大肠杆菌ASKA文库筛选出大量潜在戊二胺耐受靶点，结合生物信息学技术，最终挖掘到编码内膜蛋白的耐受基因ydgK。通过在高产赖氨酸的大肠杆菌KA30中过表达，菌株在含30 g/L戊二胺的培养基中生长延滞期缩短39.3%，证实靶点具有提升底盘细胞戊二胺耐受能力的功能，进一步将其整合至KA30基因组中转座子IS1上，实现基因组多拷贝稳定表达。将重组大肠杆菌应用到戊二胺生产中，最终实现发酵生产戊二胺产量提升20.6%。本发明具有过程简洁、效果显著等特点，是一条简单、快速、高效的提升工业底盘细胞鲁棒性的方法。

公开(公告)号：CN114806996B

公开(公告)日：2023-07-21

申请号：CN202210648397.X

申请日：2022-06-09

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 王静 ,  陈可泉 ,  杨悦 ,  郭元柯 ,  唐意博 ,  廖杨 ,  马定 ,  许晟

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/31 ,  C12N15/70 ,  C12N11/093 ,  C12P13/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一株高产戊二胺基因工程菌及构建方法与应用，所述高产戊二胺基因工程菌为在出发菌中过表达大肠杆菌生物膜调控基因pgaABCD，得到高产戊二胺基因工程菌。该菌株使大肠杆菌固定化发酵产戊二胺过程中生物膜量增加，能够发挥出固定化发酵的优势，在12批连续发酵后，菌株发酵性能保持稳定，最终戊二胺的产量与原始菌株KACCPG相比提高16.45％，发酵周期也从84h减少到72h，具有良好的应用前景。

公开(公告)号：CN114774472A

公开(公告)日：2022-07-22

申请号：CN202210654192.2

申请日：2022-06-10

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 王静 ,  廖杨 ,  杨悦 ,  马定 ,  郭元柯 ,  唐意博 ,  许晟 ,  王昕 ,  陈可泉 ,  欧阳平凯

IPC: C12N15/90 ,  C12N15/70 ,  C12N15/60 ,  C12N15/31 ,  C12N1/21 ,  C12P13/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种耐受戊二胺的重组大肠杆菌构建及应用。通过大肠杆菌ASKA文库筛选出大量潜在戊二胺耐受靶点，结合生物信息学技术，最终挖掘到编码内膜蛋白的耐受基因ydgK。通过在高产赖氨酸的大肠杆菌KA30中过表达，菌株在含30 g/L戊二胺的培养基中生长延滞期缩短39.3%，证实靶点具有提升底盘细胞戊二胺耐受能力的功能，进一步将其整合至KA30基因组中转座子IS1上，实现基因组多拷贝稳定表达。将重组大肠杆菌应用到戊二胺生产中，最终实现发酵生产戊二胺产量提升20.6%。本发明具有过程简洁、效果显著等特点，是一条简单、快速、高效的提升工业底盘细胞鲁棒性的方法。

公开(公告)号：CN114774423A

公开(公告)日：2022-07-22

申请号：CN202210654193.7

申请日：2022-06-10

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 王静 ,  马定 ,  廖杨 ,  郭元柯 ,  杨悦 ,  唐意博 ,  陈可泉

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/70 ,  C12N15/66 ,  C12N15/60 ,  C12N15/52 ,  C12N1/21 ,  C12P13/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种大肠杆菌戊二胺响应启动子及应用。从头合成谷氨酸棒状杆菌中的丙酮酸羧化酶并在大肠杆菌中异源表达，PCR拷贝大肠杆菌中戊二胺响应启动子PgrcA及赖氨酸脱羧酶cadA，构建了PcadR‑PgrcA‑pyc‑trc‑cadA‑rrnB重组质粒。该质粒在赖氨酸高产的大肠杆菌中生长良好，基因表达稳定，葡萄糖被高效利用，能够响应戊二胺，发酵周期短，副产物少。从发酵结果可以看出，重组的大肠杆菌KAGPC的戊二胺产量较对照组有显著提高。

公开(公告)号：CN114806996A

公开(公告)日：2022-07-29

申请号：CN202210648397.X

申请日：2022-06-09

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 王静 ,  陈可泉 ,  杨悦 ,  郭元柯 ,  唐意博 ,  廖杨 ,  马定 ,  许晟

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/31 ,  C12N15/70 ,  C12N11/093 ,  C12P13/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一株高产戊二胺基因工程菌及构建方法与应用，所述高产戊二胺基因工程菌为在出发菌中过表达大肠杆菌生物膜调控基因pgaABCD，得到高产戊二胺基因工程菌。该菌株使大肠杆菌固定化发酵产戊二胺过程中生物膜量增加，能够发挥出固定化发酵的优势，在12批连续发酵后，菌株发酵性能保持稳定，最终戊二胺的产量与原始菌株KACCPG相比提高16.45％，发酵周期也从84h减少到72h，具有良好的应用前景。