一种西番莲病毒病原多重复合PCR检测方法

    公开(公告)号:CN111424118A

    公开(公告)日:2020-07-17

    申请号:CN202010332050.5

    申请日:2020-04-24

    Abstract: 本发明公开了一种西番莲病毒病原多重复合PCR检测方法,包括以下步骤:提取样本总RNA;设计用于扩增西番莲中重要病毒病原黄瓜花叶病毒、芜菁花叶病毒、西番莲果实木质化病毒、夜来香花叶病毒4种病毒基因片段的特异性引物;在无RNA酶的PCR管中加入提取的西番莲植物总RNA样品1~3μg高温变性获得病毒RNA作为模板进行逆转录反应合成cDNA第一链;利用单管多重PCR扩增反应得到PCR扩增产物;将获得的PCR扩增产物进行2.0%琼脂糖凝胶电泳检测。本发明应用黄瓜花叶病毒、芜菁花叶病毒、西番莲果实木质化病毒、夜来香花叶病毒4种病毒特异引物可以同时在单PCR管中检测4种西番莲主要病毒,特异性、简便性、灵敏度和准确性较单一病毒或两种病毒检测有较大的优势。

    一种灵芝小孔开袋覆土种植方法

    公开(公告)号:CN112913575A

    公开(公告)日:2021-06-08

    申请号:CN202110241536.2

    申请日:2021-03-04

    Abstract: 本发明公开了一种灵芝小孔开袋覆土种植方法,包括如下步骤:S1、选择适宜灵芝种植的林下或设施棚作为种植场地,开挖种植槽,或者在土壤表面打出若干种植穴,然后在种植槽或种植穴表面撒少量熟石灰粉;S2、在灵芝菌棒的上端棒肩处剪去直径1‑3厘米的菌袋塑料,开出小孔;S3、将开小孔的灵芝菌棒轻轻移入种植槽或种植穴内,开孔端向上;S4、在种植槽或种植穴上覆土,覆土盖过灵芝菌棒的上端,即完成灵芝小孔开袋覆土种植。本发明原理简单,菌棒污染低,出菇快,出菇率高,种植户易学,容易接受,便于推广,应用前景广阔,可明显提高种植效益和林地经济效益。

    一种烟草花叶型病毒的快速灵敏检测方法

    公开(公告)号:CN103740865B

    公开(公告)日:2015-04-01

    申请号:CN201410034604.8

    申请日:2014-01-25

    Abstract: 本发明公开了一种烟草花叶型病株中烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒、烟草脉带花叶病毒3种病毒的检测方法。通过烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒、烟草脉带花叶病毒特异性混合抗体诱捕病样中病毒,不必提取样品总RNA进行随机引物逆转录和特异性病毒引物复合PCR反应,专门针对烟草生产过程对烟草中上部叶片为害较为严重且不能从症状区分病原而建立的一种单管同时检测3种病毒中的1、2或3种不同病毒组合的方法,检测时间仅需5小时。本方法将快速、特异的免疫沉淀与灵敏的复合RT-PCR结合,同时设置健康烟草随机引物cDNA产物和相应病毒PCR特异片段阳性质粒作为阴、阳性对照,从而快速、准确、灵敏的检测田间烟草植株样品、抗病毒材料及田间环境疑似侵染源等。

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