公开(公告)号：CN101864436B

公开(公告)日：2012-05-23

申请号：CN201010183169.7

申请日：2010-05-26

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 姜巨全 ,  李士龙 ,  徐伟慧 ,  王志刚 ,  于丁

IPC: C12N15/53 ,  C12N15/70 ,  C12N9/02 ,  C12P13/24

Abstract: 同位素13C标记的4-羟基脯氨酸的生物合成方法，它涉及4-羟基脯氨酸的合成方法。它解决了现有制备4-羟基脯氨酸的方法不适用于合成13C标记的4-羟基脯氨酸的问题。方法：一、对指孢囊菌中编码L-脯氨酸的4-羟基化酶的基因phy-1的原始序列进行密码子优化，获得优化的phy-1基因；二、优化的phy-1基因与pET19分别进行双酶切，构建原核表达载体，转入大肠杆菌中进行蛋白高效表达及纯化；三、纯化后的L-脯氨酸的4-羟基化酶进行酶反应，纯化后即完成。本发明实现了13C标记的4-羟基脯氨酸的制备，纯化过程简单，成本低，并且所得13C标记的4-羟基脯氨酸的纯度达99.99％，回收产率为75.34％。