电压门控钠通道基因、编码蛋白及其克隆方法

    公开(公告)号:CN101654675A

    公开(公告)日:2010-02-24

    申请号:CN200910053876.1

    申请日:2009-06-26

    Applicant: 上海大学

    Abstract: 本发明涉及一种东亚钳蝎的电压门控钠通道基因、编码蛋白及其克隆方法。本发明的一种电压门控钠通道基因具有SEQ NO 1所示的碱基序列,其编码蛋白具有SEQ NO 2所示的氨基酸序列。该电压门控钠通道基因的克隆方法的具体步骤为:首先从东亚钳蝎的腹神经纤维中提取总RNA;然后用Superscript II反转录酶和Oligo-(dT)引物合成单链cDNA;最后借鉴昆虫Para钠通道的保守氨基酸残基设计退火引物,再采用兼并PCR以及cDNA末端的快速扩增技术,得到全长cDNA。本发明利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR),兼并PCR(Nested-PCR)以及cDNA末端的快速扩增(RACE)技术,得到了东亚钳蝎的全长cDNA。另通过突变实验以及电生理记录检验了突变体对特异性钠通道调制剂BmKI的敏感性,证明该新型钠通道基因可作为膜离子通道调制剂作用机制的研究模板。

    钠通道调制剂BmKαⅣ基因及其克隆、重组蛋白表达方法

    公开(公告)号:CN1896236A

    公开(公告)日:2007-01-17

    申请号:CN200510111913.1

    申请日:2005-12-23

    Applicant: 上海大学

    Abstract: 本发明涉及一种钠通道调制剂BmK αIV基因及其克隆、重组表达及功能鉴定方法。属分子生物学和生物技术领域。本发明提供了BmK αIV全基因克隆操作的技术路线。建立了基因工程方法重组表达、纯化功能性BmK αIV多肽的技术体系。提供了BmK αIV与大鼠突触体膜和蟑螂神经索突触体膜钠通道标本结合的动力学参数。本发明提供了BmK αIV对大鼠DRG神经元钠通道调节的作用和技术参数。本发明提供了BmK αIV对rNav1.2钠通道调节的作用和技术参数。从上述实验可知,BmK αIV是一个新型的具有独特结构和功能的肽类钠通道调制剂,可作为研究钠通道组成和生物化学信号特征的工具药,并可开发为调节和治疗钠通道相关生理和病理现象的药物或药物先导。BmK αIV的基因工程表达技术为以后的工厂化表达提供了可行、可靠的强有力技术保障。

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