一种用于筛选流感病毒聚合酶组装抑制剂的细胞系及其构建方法

    公开(公告)号:CN105505880B

    公开(公告)日:2016-11-09

    申请号:CN201511008822.5

    申请日:2015-12-29

    CPC classification number: C12N5/10 C12N15/867

    Abstract: 本发明提供了一种用于筛选流感病毒聚合酶组装抑制剂的细胞系及其构建方法,通过建立特意性引物的序列为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4,所述引物用于筛选流感病毒聚合酶组装抑制剂用细胞系的构建,所述细胞系为用于筛选PA‑PB1的PA/PB1 293(Teton)细胞系,所述PA/PB1 293(Teton)细胞系由表达PA‑GlucC融合蛋白载体、表达GlucN‑PB1融合蛋白载体通过pMDLg/pRRE/,pRSV‑Rev,pMD2.G三质粒系统整合于293T(Teton)细胞内,所述293T(Teton)细胞系由合成的Teton‑3G的基因片段连接于慢病毒载体FG上,转化至TOP10感受态细胞中形成。本发明的有益效果:能高效的对能够抑制针对流感病毒聚合酶组装的抑制剂进行筛选,以更快的找出所需的抑制剂,大大的提高了效率。

    人源化PD-L1肿瘤细胞系及具有该细胞系的动物模型与应用

    公开(公告)号:CN105950560B

    公开(公告)日:2019-07-23

    申请号:CN201610347749.2

    申请日:2016-05-24

    Abstract: 本发明提供了一种人源化PD‑L1肿瘤细胞系,所述细胞系为MC‑38‑hPD‑L1,并建立具有人源化PD‑L1肿瘤细胞系的动物肿瘤模型,同时揭示了一种人源化PD‑L1肿瘤细胞系的构建方法,具体通过CRISPR‑CAS9敲除动物源的PD‑L1,扩大培养获得敲除细胞库,提取DNA进行PCR扩增,回收扩增产物并进行克隆,最后通过慢病毒体系将人源PD‑L1在mPD‑L1 KO的MC‑38细胞系中过表达,随后进行慢病毒的包装及Puromycin筛选获得人源化的PD‑L1的MC‑38细胞系。结果显示抗体治疗后的肿瘤浸润CD8 T淋巴细胞明显表现出更强的杀伤和增殖能力,此外我们也发现抗体治疗后肿瘤浸润的Treg细胞明显被抑制。这从分子机理上进一步证明该方法有效可行。

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