公开(公告)号：CN105132535A

公开(公告)日：2015-12-09

申请号：CN201510469573.3

申请日：2015-08-04

Applicant: 福州大学

Inventor： 陈文锋 ,  杨宇丰 ,  孙玲

IPC: C12Q1/68

CPC classification number: C12Q1/6848 ,  C12Q2549/119 ,  C12Q2547/101

Abstract: 本发明属于分子生物学及基因工程领域，涉及一种猴子早期胚胎转基因敲入的PCR鉴定方法。含有0.2-0.5μl培养基的单个注射完的早期胚胎收集于薄壁透明PCR管底部；用枪头小心加入DLB裂解液5μl至PCR管底部，不要接触到含有胚胎的培养基；置于冰上裂解15-30min释放基因组DNA；裂解产物直接全部用于全基因组扩增反应；然后用两轮巢式PCR扩增方法进行转基因敲入鉴定。本发明的方法能稳定地对少至只有16个细胞的猴子单个胚胎进行操作，所有操作步骤一直在同一PCR管中操作，防止操作过程造成微量基因组的丢失。同时，高保真横向扩增的方法拓展了基因组的下游应用，按照此方法可稳定、准确、简便地实现对猴子单个胚胎基因组敲入的快速PCR鉴定。