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公开(公告)号：CN109867663A
公开(公告)日：2019-06-11
申请号：CN201811631577.7
申请日：2018-12-29
Applicant: 浙江工业大学 , 浙江绿创生物科技有限公司
IPC: C07D407/04
Abstract: 本发明涉及一种金黄霉素A和金黄霉素B的分离纯化方法。现有方法中有机溶剂回收条件要求高，上样量小，收率低，成本高。本发明的技术方案如下：[1]将金黄霉素A、B发酵液板框过滤，得到湿菌渣。[2]用有机溶剂萃取湿菌渣，过滤得到提取液。[3]将提取液真空浓缩，加入非水溶性有机溶剂溶解。[4]静止分层，收集非水溶性有机溶剂层。[5]加活性炭、无水硫酸钠脱色后抽滤，滤液真空浓缩。[6]加有机溶剂溶解。[7]上制备色谱分离。本发明分离纯化金黄霉素A、B的方法操作简单，有机溶剂用量少，避免了因使用大孔树脂、硅胶或有机溶剂结晶而产生大量废水和有机溶剂。
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公开(公告)号：CN109439605A
公开(公告)日：2019-03-08
申请号：CN201810455195.7
申请日：2018-05-14
Applicant: 浙江工业大学 , 浙江绿创生物科技有限公司
Abstract: 本发明涉及一种工程菌及其构建方法，具体是一种提高酪氨酸酚裂解酶稳定性的工程菌及其构建方法与应用，属于基因工程技术领域。该工程菌经鉴定为大肠埃希氏菌，命名为大肠埃希氏菌Trx-TPL(Escherichia coli Trx-TPL)，保存于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉，武汉大学，保藏日期为2017年11月13日，保藏编号为CCTCC NO：M2017684。本发明将两个酪氨酸酚裂解酶基因与硫氧还原蛋白基因连接在一起构建表达质粒，可以有效提高表达的酶的稳定性，尤其是热稳定性，可以在提供相关底物下，延长转化合成左旋多巴的时间，增加底物浓度，工艺简单，成本低廉，产率高，具有工业化生产的应用价值。
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公开(公告)号：CN110372769B
公开(公告)日：2020-10-02
申请号：CN201811653139.0
申请日：2018-12-29
Applicant: 浙江工业大学 , 浙江绿创生物科技有限公司 , 湖南新合新生物医药有限公司
Abstract: 本发明涉及一种甾体发酵后提取新方法，其包括以下工艺步骤：发酵液升温灭活；初始膜水通量的测定，发酵液进行膜过滤收集截留液，再进行膜的清洗，洗至初始膜水通量；所得截留液继续用甲醇萃取，分层得到甾体产品甲醇萃取液，再继续浓缩至粘稠状加水分散过滤得粗品；粗品再用第一种溶剂升温打浆，降温过滤得一精，一精再用第二种溶剂溶解、脱色、重结晶即得成品。本发明设计合理，工艺简单，可操作性强，工作环境毒害性小，不仅避免了传统工艺全萃法的的乳化难分离现象，而且提供了一种新型的分离方法，避免了有毒萃取有机溶剂的使用，解决了废水处理问题。该法成本低，收率高，最终产品符合市场品质要求。
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公开(公告)号：CN110055290A
公开(公告)日：2019-07-26
申请号：CN201810907482.7
申请日：2018-08-10
Applicant: 浙江工业大学 , 浙江绿创生物科技有限公司
Abstract: 本发明涉及一种固定化酶催化生产左旋多巴的方法，其特征在于：(1)挑单菌落接种到含LB培养基的试管中，加氨苄青霉素(100mg/L)30-37℃，220rpm，培养12-16h，得到一级种子；(2)将所述一级种子接种到含发酵培养基的摇瓶中培养10-12h；(3)离心收菌，得到菌体，压榨破胞，加壳聚糖溶液絮凝，高速离心，获得上清酶液，加入固定化载体EP200，25℃搅拌混合12-24h，三足式离心收集固定化酶，用50mM的磷酸钾缓冲液(pH8.0)，多次洗涤，过滤，获得固定化酶；(4)固定化酶20g，加入底物溶液，搅匀，25℃，密封震荡反应；所述底物溶液包括14-16g/L的丙酮酸钠、10-12g/L的邻苯二酚、40-45g/L的氯化铵、2-5g/L的亚硫酸钠、1-3g/L的EDTA，调pH7.5-8.5。
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