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公开(公告)号:CN105177107A
公开(公告)日:2015-12-23
申请号:CN201510602667.3
申请日:2015-09-21
Applicant: 云南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种检测稻瘟菌基因促进稻瘟病菌菌丝生长和产孢的方法,它涉及植物保护和生物技术领域,它将基因的原核表达产物加于培马铃薯蔗糖养基中,再将菌落接种于含有原核表达产物的PSA培养基中于28℃振荡培养箱中培养三天,过滤菌丝烘干称重;同时收集滤液,进行孢子计数。它提供一种更为简便、快速的确定病菌基因对病菌自身的影响,为更准确分析基因功能奠定重要的实验基础。
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公开(公告)号:CN103175810B
公开(公告)日:2015-09-02
申请号:CN201210554731.1
申请日:2012-12-05
Applicant: 云南农业大学
CPC classification number: G01N21/6458
Abstract: 本发明公开了一种观测融合蛋白长距离转运至水稻叶芽的方法,该方法将GFP融合蛋白处理水稻根尖后,处理过根尖的水稻植株叶芽进行冷冻切片,切片后PI荧光染料进行染色,共聚焦显微镜直接观测GFP融合蛋白从水稻根尖转运至叶芽。该方法利用GFP融合蛋白处理水稻根尖0.5cm处,叶芽被冷冻切片后PI染色,共聚焦显微镜观测GFP融合蛋白从水稻根尖转运至叶芽,能直接定性地了解GFP融合蛋白在水稻植株内的长距离转运情况。GFP融合蛋白直接处理水稻根尖0.5cm处,共聚焦显微镜观测GFP融合蛋白转运至叶芽可为进一步开展效应蛋白能引起水稻系统防御反应提供非常强有力的证据。该方法简便、准确、快速。
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公开(公告)号:CN104355706A
公开(公告)日:2015-02-18
申请号:CN201410646236.2
申请日:2014-11-15
Applicant: 云南农业大学
IPC: C05F15/00
CPC classification number: C05F11/00 , A01C21/005
Abstract: 本发明公开了一种平菇菌糠有机肥的制备方法,其原料按重量百分比包括:平菇菌糠60-80%,万寿菊叶20-40%;制备过程中,干燥平菇菌糠,接着粉碎后过10-30目筛;干燥万寿菊叶,接着粉碎后过20-40目筛;将过筛后的平菇菌糠和过筛后的万寿菊叶按所述重量百分比配比,混合均匀得到平菇菌糠有机肥。本发明还公开了上述平菇菌糠有机肥的施用方法。本发明能有效防治土壤中根结线虫,降低根结线虫对植物的危害,并且肥效高,尤其能促进番茄生长,生产成本低,工艺简单,充分利用食用菌产业废料和农业废弃物,实现资源的循环利用。
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公开(公告)号:CN102634509B
公开(公告)日:2014-04-16
申请号:CN201210126926.6
申请日:2012-04-27
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12N15/10
Abstract: 本发明公开了一种直接从感病小麦叶片上高效快速提取小麦条锈菌DNA的方法,其特征在于,吸取20μl配好的20%的chelex-100混悬液于100μl PCR管中,吸取5μl的Chelex-100上清液于长有小麦条锈菌夏孢子小麦叶片上,并在滴有Chelex-100上清液的病斑处反复涂抹叶片多次,将锈孢子洗下后,吸回叶片上含有锈孢子的Chelex-100上清液并加入到装有20μl 20%chelex-100混悬液的PCR管中,用移液器反复吸取混匀,放入沸水浴中水浴2min,再放到旋涡混合器上振荡混匀10s,水浴5min后保存于-20℃备用,上清液均可作为PCR的模板。建立一套高效、快速、可直接从感小麦条锈病菌的植株上提取小麦条锈病菌DNA作为PCR扩增模板的方法。
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公开(公告)号:CN103175810A
公开(公告)日:2013-06-26
申请号:CN201210554731.1
申请日:2012-12-05
Applicant: 云南农业大学
CPC classification number: G01N21/6458
Abstract: 本发明公开了一种观测融合蛋白长距离转运至水稻叶芽的方法,该方法将GFP融合蛋白处理水稻根尖后,处理过根尖的水稻植株叶芽进行冷冻切片,切片后PI荧光染料进行染色,共聚焦显微镜直接观测GFP融合蛋白从水稻根尖转运至叶芽。该方法利用GFP融合蛋白处理水稻根尖0.5cm处,叶芽被冷冻切片后PI染色,共聚焦显微镜观测GFP融合蛋白从水稻根尖转运至叶芽,能直接定性地了解GFP融合蛋白在水稻植株内的长距离转运情况。GFP融合蛋白直接处理水稻根尖0.5cm处,共聚焦显微镜观测GFP融合蛋白转运至叶芽可为进一步开展效应蛋白能引起水稻系统防御反应提供非常强有力的证据。该方法简便、准确、快速。
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公开(公告)号:CN106754614A
公开(公告)日:2017-05-31
申请号:CN201710078834.8
申请日:2017-02-14
Applicant: 云南农业大学
CPC classification number: C12N1/36 , C12N1/14 , C12Q1/6895 , C12Q2600/158
Abstract: 本发明公开了一种抑制侵染水稻PCD途径相关基因上调的方法,采用弱酸处理稻瘟菌效应蛋白基因过表达菌株孢子;用悬浮液喷雾接种水稻叶片;于不同时间点取样,提取水稻样品总RNA;反转录成cDNA,real‑time RT‑PCR检测cDNA;分析PCD途径相关的主要基因PR1a和PR5在不同时间点的表达。与现有技术相比,本发明克服了研究非生物环境pH影响寄主‑病原互作机制中,常借助温室设计各种弱酸处理以观察寄主表型变化、以及筛选大量水稻防御相关基因表达等周期长和效率低的弊端,提供了一种更为简便、有效、准确地弱酸处理病原菌孢子、定量检测水稻PCD途径主要相关基因表达的方法,为更快速准确地进行弱酸对水稻与稻瘟病菌互作机制的研究提供重要的实验依据。
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公开(公告)号:CN105779588A
公开(公告)日:2016-07-20
申请号:CN201610057178.9
申请日:2016-01-28
Applicant: 云南农业大学
CPC classification number: C12Q1/6895 , C12Q1/6851 , C12Q2600/13 , C12Q2600/158 , C12Q2531/113
Abstract: 本发明公开了一种烟草多酚类物质诱导植物免疫反应的检测方法,利用提取分离到的烟草单宁类物质处理感病水稻叶片6h后再接种强致病菌株,调查水稻抗感反应;real?time RT?PCR分析水稻早期响应的防御相关基因表达以及qPCR检测病斑的真菌相对生长量;烟草单宁类物质按照10~500ppm浓度喷雾水稻叶片6h再接种强致病菌株;调查抗感反应以及real?time RT?PCR分析水稻防御相关基因表达。与现有技术相比,本发明全面准确地明确烟草单宁类物质能诱导感病水稻免疫反应响应。克服了已有单一地通过病原菌弱毒毒系处理感病植株再挑战接种强度菌株诱导免疫反应过程中诸多易受环境影响的弊端,最终达到为今后测定病原菌效应蛋白提高病原菌侵染力的方法提供准确全面的方法的目的。
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公开(公告)号:CN103267727B
公开(公告)日:2016-03-16
申请号:CN201310187191.2
申请日:2013-05-20
Applicant: 云南农业大学
CPC classification number: G01N33/5097 , G01N2021/6432 , G01N2021/6439
Abstract: 本发明公开了一种检测稻瘟病菌效应蛋白在水稻根组织内转运的方法,该方法包括以下步骤:稻瘟病菌病原相关分子模式MgNIP53的验证,融合蛋白处理水稻根尖,免疫荧光染色方法处理水稻,观察融合蛋白在水稻根组织内的转运。该方法通过一系列方法鉴定到了一个稻瘟病菌病原相关分子模式MgNIP53,采用融合蛋白处理水稻根尖,最后采用免疫荧光法处理水稻根尖来观察融合蛋白在水稻根组织内的转运,本发明提供的方法简便、准确、快速,为今后开发生物制剂进行有效生物防治稻瘟病提供有力参考。
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公开(公告)号:CN104404152A
公开(公告)日:2015-03-11
申请号:CN201410723122.3
申请日:2014-12-03
Applicant: 云南农业大学
CPC classification number: C12Q1/6895 , C12Q1/6809 , C12Q2600/13 , C12Q2600/156 , C12Q2565/125
Abstract: 本发明提供了检测水稻稻瘟病菌基础抗性的基因型表达分子标记及应用,可用于水稻对稻瘟病菌基础抗性的鉴定。该分子标记的核苷酸序列为SEQ ID No.1,利用本发明所述引物对,以水稻基因组DNA为模板进行PCR扩增,可以得到与水稻对稻瘟病菌基础抗性基因紧密连锁的基因型分子标记。通过PCR扩增分析可以明确该标记的有无可以判断水稻对稻瘟病菌基础抗性的有无,能够用于水稻对稻瘟病菌基础抗性有无的检测。该基因型分子标记带型简单、分布较密等特点具有SSR不可比拟的优势,能快速精确检测亚种内品种间的多态性,具有广阔的应用前景。
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