红豆杉3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合成酶蛋白编码序列

    公开(公告)号:CN1584033A

    公开(公告)日:2005-02-23

    申请号:CN200410024891.0

    申请日:2004-06-03

    Abstract: 一种涉及生物基因工程领域的红豆杉3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合成酶蛋白编码序列。所分离出的DNA分子包括:编码具有红豆杉tm-Hmgs蛋白活性的多肽的核苷酸序列,所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.3中从核苷酸第98-1528位的核苷酸序列有至少70%的同源性;所述的核苷酸序列能在40-55℃条件下与SEQ ID NO.3中从核苷酸第98-1528位的核苷酸序列杂交。本发明是一种催化乙酰辅酶A和乙酰乙酰辅酶A缩合生成3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A的酶,有助于提高紫杉醇或其前体的含量,对于紫杉醇药源的严重匮乏问题的解决和保护人民的健康生长有所帮助。

    一种用于合成生物学部件高效组装的试剂盒及其使用方法

    公开(公告)号:CN111748540A

    公开(公告)日:2020-10-09

    申请号:CN202010574178.2

    申请日:2020-06-22

    Abstract: 本发明公开了一种用于合成生物学部件高效组装的试剂盒及其使用方法,涉及合成生物学领域。试剂盒包括缓冲液、ATP、ⅡS核酸内切酶和T4DNA连接酶。本发明还提供该试剂盒的使用方法,即利用缓冲液、ATP和超纯水构建缓冲体系;加入T4DNA连接酶和ⅡS核酸内切酶,形成酶切连接体系;加入待组装部件和目标空载体,添加超纯水调整反应体系的体积;在PCR仪上进行热循环;PCR产物直接用于大肠杆菌转化,在筛选平板上选择白色抗性克隆,纯化质粒即可获得包含组装部件的目标重组载体。本发明从反应缓冲体系、ⅡS核酸内切酶活力以及部件与空载体的加入比例三方面入手进行优化,大幅度降低了合成生物学复杂通路的构建难度和成本。

    利用固体酸碱催化合成长春西汀的方法

    公开(公告)号:CN103333166B

    公开(公告)日:2016-07-06

    申请号:CN201310261417.9

    申请日:2013-06-26

    Abstract: 本发明公开了一种利用固体酸碱催化合成长春西汀的方法,所述方法包括如下步骤:步骤1,固体碱水解:将长春胺乙醇溶液送入固体碱水解柱中,进行水解反应;步骤2,分子筛脱水:将水解后的长春胺乙醇溶液通过分子筛脱水柱,进行脱水反应;步骤3,固体酸脱水酯化:脱水后的料液进入固体酸脱水酯化柱,进行固体酸脱水酯化,即可。本发明采用强碱代替氢氧化钠催化长春胺水解,固体强酸代替浓硫酸进行脱水、酯化得到长春西汀,本方法所用催化剂可以和产物方便的分离,降低生产成本;本发明方法生产过程中不产生酸碱废水,环保性好,更适于工业化生产;可重复使用,有效的降低生产成本,所用固体酸碱对设备无腐蚀,不产生酸碱废水,绿色环保。

    从楸树内生真菌发酵液中浓缩分离楸灵素的方法及其应用

    公开(公告)号:CN104387425A

    公开(公告)日:2015-03-04

    申请号:CN201410532262.2

    申请日:2014-10-11

    Abstract: 本发明公开一种从楸树内生真菌发酵液中浓缩分离楸灵素的方法及其应用;所述方法包括如下步骤:步骤一、调整楸树内生真菌发酵液pH为4~10;步骤二、预冷pH调整后的楸树内生真菌发酵液至预冷温度为0~4℃;步骤三、在保持晶核存在的情况下对步骤二所述楸树内生真菌发酵液进行缓慢降温至结冰;步骤四、继续缓慢降温结冰,直至剩余液态发酵液的体积缩至设定值,停止降温,收集未结冰的液体部分,即得楸灵素浓缩液。本发明将楸树内生真菌发酵液浓缩到原体积的十分之一以下,同时保证90%以上的楸灵素收率。与现有技术相比,本发明不仅可以更有效的保证原料中楸灵素的稳定、确保较高的浓缩收率,而且不添加任何有机溶剂,保证浓缩液质量。

    抑制肝癌细胞生长的发酵液的制备方法

    公开(公告)号:CN101487022B

    公开(公告)日:2010-09-29

    申请号:CN200810041214.8

    申请日:2008-07-31

    Abstract: 一种分子生物学技术领域的制备方法,该制备方法包括如下步骤:第一步、内生真菌的分离:分离内生真菌并且采用菌丝尖端切割法进行纯化;第二步、诱导孢子产生:将长枝木霉CCTCC M 208102接种到PDA培养基上培养,将长有菌丝的PDA培养基切下一小块,放于CMX培养基上,室温下培养,1到3天后有孢子长出;第三步、液体发酵培养:挑取孢子转接到装有CM液体培养基中,26℃到28℃,180rpm摇床振荡培养,7到8天后中止发酵,即得具有抑制肝癌细胞生长作用的发酵液。本发明适合工业规模化发酵生产具有抑制人肝癌细胞株HepG2生长的作用且高效低毒的发酵液。

    海藻氨基酸稀土复合叶面肥及其制备方法

    公开(公告)号:CN1944353A

    公开(公告)日:2007-04-11

    申请号:CN200610117577.6

    申请日:2006-10-26

    Abstract: 一种农业技术领域的海藻氨基酸稀土复合叶面肥及其制备方法,其制备过程如下:A)取0.1-2克海藻,进行切割粉碎,获得粒度在100微米以下的超细粒度的海藻粉;B)取0.2-2克复合氨基酸粉,将二者加入到1-5倍重量的1-6N的磷酸或者醋酸溶液中,60-120℃保温2-40小时酸解,得到海藻寡糖、多肽以及氨基酸的混合溶液。C)用氨水、氢氧化钠或者石灰水调整混合溶液的pH到5-7之间,加入金属盐母液0.5-5mL和稀土母液0.1-1mL。D)加水将混合溶液调整到11,并最后用氨水、氢氧化钠或者石灰水调整混合溶液的pH到5-7之间,即为复合叶面肥。本发明能够更进一步提高植物的光合效率,从而促进植物以更快的速度生长。

    提高长春花毛状根萜类吲哚生物碱含量的方法

    公开(公告)号:CN1858212A

    公开(公告)日:2006-11-08

    申请号:CN200510112213.4

    申请日:2005-12-29

    Abstract: 本发明是一种生物技术领域的提高长春花毛状根TIAs含量的方法。本发明从长春花中克隆str和g10h基因,构建含str和g10h基因的植物表达载体,遗传转化长春花获得转基因长春花毛状根,高效液相色谱法测定长春花毛状根中TIAs含量,荧光定量PCR测定长春花毛状根TIAs生物合成相关基因的表达。本发明获得的转基因长春花毛状根中重要TIAs[抗癌药物长春碱(Vinblastine)、长春新碱(Vincristine)]的含量显著提高,其中长春碱含量比非转化对照根提高了234倍,从而提供了一种提高长春花毛状根TIAs的方法,也为生产具重要临床需求的抗癌药物长春碱和长春新碱提供了一种新方法。

    能够有效治疗脑癌的胡桃楸多糖制剂及其制备方法

    公开(公告)号:CN1850102A

    公开(公告)日:2006-10-25

    申请号:CN200610024276.9

    申请日:2006-03-02

    Abstract: 一种能够有效治疗脑癌的胡桃楸多糖制剂及其制备方法,属于医药技术领域。本发明所述胡桃楸制剂组分重量百分比为:胡桃楸多糖85-98%,黄酮类物质15-2%。制备如下:(1)胡桃楸材料的收集和干燥;(2)胡桃楸抗癌活性成分的提取:干燥后的胡桃楸材料进行粉碎,加水,加热保温,分离清液和残渣,再按照相同方法加新水加热熬煮胡桃楸材料残渣,并过滤收集清液,合并清液,进行浓缩,然后分别加氯仿去蛋白和高疏说性的脂类成分,并加乙醇沉淀胡桃楸多糖。最后通过干燥、粉碎、过筛,得到活性多糖粉末;(3)抗癌汤剂的配置。本发明制备可以有效治疗脑癌的中药制剂,疗效高,毒副作用低,工艺简单、无三废污染,宜于大规模工业化生产。

    用转录因子提高长春花毛状根萜类吲哚生物碱含量的方法

    公开(公告)号:CN1807631A

    公开(公告)日:2006-07-26

    申请号:CN200610023234.3

    申请日:2006-01-12

    Abstract: 本发明是一种生物技术领域的用转录因子提高长春花毛状根萜类吲哚生物碱含量的方法。本发明从长春花中克隆str和g10h基因,构建含str和g10h基因的植物表达载体,遗传转化长春花获得转基因长春花毛状根,液相色谱法测定长春花毛状根中生物碱含量,荧光定量PCR测定长春花毛状根生物碱生物合成相关基因的表达。本发明获得的转基因长春花毛状根中重要生物碱的含量显著提高,其中长春碱含量比非转化对照根提高了234倍,从而提供了一种提高长春花毛状根生物碱的方法,也为生产具重要临床需求的抗癌药物长春碱和长春新碱提供了一种新方法。

    楸树内生真菌的原生质体的制备方法

    公开(公告)号:CN103756917B

    公开(公告)日:2016-05-04

    申请号:CN201410016834.1

    申请日:2014-01-14

    Abstract: 本发明提供了一种楸树内生真菌的原生质体的制备方法;所述方法包括以下步骤:步骤1,菌丝体的制备;步骤2,原生质体的制备;步骤3,原生质体纯化;步骤4,原生质体再生。本发明所述方法制备的原生质体数量较多,可达到6×107个/毫克菌丝,获得的原生质体的活力较高,再生率可达到1.2%。本发明选择培养12-24h的菌丝体,真菌处于快速生长期,生长快,细胞壁易于酶的裂解,释放出的原生质体的数量多,不易裂解,活力高。本发明选取5~30mg/ml Glucanex复合酶作为细胞壁裂解酶液,裂解效率高,原生质体释放数量多。本发明选用KCl或NaCl作为渗透压稳定剂,保证了原生质体制备数量与原生质体的稳定。

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