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公开(公告)号：CN108866047A
公开(公告)日：2018-11-23
申请号：CN201810926768.X
申请日：2018-08-14
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12N15/10
Abstract: 本发明公开了一种基于反复冻融方式的基因组DNA提取方法，向提取细胞培养物(细菌，真菌，线虫等)加入提取缓冲液，混匀后反复冻融两次，加入RNase 37℃孵育10min，再加入5M NaCl和10％SDS充分混匀后，再次冻融，加入苯酚‑氯仿‑异戊醇(25∶24∶1)的混合溶液，抽提；加入氯仿‑异戊醇(24∶1)混合溶液，抽提；加入冷乙醇和醋酸钠，离心，沉淀经乙醇洗涤后室温干燥；加ddH2O或TE缓冲液溶解DNA。本方法基于反复冻融方式进行，适用广泛，效率高、提取的DNA质量高，具有很好的通用性。
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公开(公告)号：CN108130339A
公开(公告)日：2018-06-08
申请号：CN201810026881.2
申请日：2018-01-11
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种适用于吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007的高效转化方法，包括：1)取感受态细胞，冰浴融化；2)取pHKT2质粒加入含感受态细胞混匀，冰浴15～75min；3)液氮冷冻30～150sec，32～42℃水浴1～5min；4)冰浴5min；5)加LB无抗生素液体培养基，200rpm，30℃震荡培养3h；6)离心浓缩菌液，弃上清液，重悬菌液后涂布于含有TMP的平板，28℃恒温培养，36h后获得转化细胞。本发明的方法，操作简单，转化率高，最高达到6363.64cfu/μg。本申请成功建立生防菌B.pyrrocinia JK-SH007的最优转化体系，为后续的实验提供技术支持。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110656068A
公开(公告)日：2020-01-07
申请号：CN201911056441.2
申请日：2019-10-31
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种吡咯伯克霍尔德氏菌形成生物膜的方法，包括以下步骤：1)采用LB固体平板活化吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007菌种，获得单菌落，挑取单菌落进入LB液体培养基，180r/min，28℃纯培养24h，获得菌悬液；2)配置供试培养基TMG，在TSB培养基中加入1％v/v甘油和25mM MgSO4，pH 5-7；3)将菌悬液1％v/v接种至TMG液体培养基，180r/min，28℃纯培养24h取出后静置4-6天，形成生物膜。本发明配置了一种可诱导JK-SH007形成生物膜的培养基TMG，JK-SH007经过该培养基培养后，可形成肉眼可见的生物膜，使得其在营养匮乏的环境下更好的存活。
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公开(公告)号：CN107988186A
公开(公告)日：2018-05-04
申请号：CN201711273657.5
申请日：2017-12-06
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种冷适应性内切β-1,4-葡聚糖酶及其表达基因和应用，所述的冷适应性内切β-1,4-葡聚糖酶的氨基酸序列如 SEQ ID NO.1所示，其表达基因的核苷酸序列如 SEQ ID NO.3所示。本发明采用PCR技术从Burkholderia pyrrocinia JK-SH007的总DNA中扩增内切葡聚糖酶基因片段，原核表达并纯化得到内切β-1,4-葡聚糖酶。通过对内切β-1,4-葡聚糖酶酶学分析表明：内切β-1,4-葡聚糖酶基因对羧甲基纤维素的最适反应温度为35℃，与报道的同类酶相比最适温度下降了10-20℃。最适pH为6.0，该酶在30-45℃和中性环境下较稳定，是一种具有良好工业应用价值的冷适应酶，将该酶运用于生物质能源领域将有利于降低其成本，进而实现同步发酵，且对阐释内切β-1,4-葡聚糖酶的相关生物学功能也具有重要意义。
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公开(公告)号：CN106799394A
公开(公告)日：2017-06-06
申请号：CN201710065331.7
申请日：2017-01-23
IPC: B09C1/08
Abstract: 本发明属于生物技术领域，特别涉及嗜铁素在降低土壤重金属浓度中的应用。将嗜铁素用于降低土壤中的重金属浓度，发现其对重金属有螯合作用，特别是对铜、铬、锌三种重金属的螯合效果最佳，重金属的降低率分别达到了84.54％、95.20％、82.89％。
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公开(公告)号：CN110656068B
公开(公告)日：2022-11-22
申请号：CN201911056441.2
申请日：2019-10-31
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种吡咯伯克霍尔德氏菌形成生物膜的方法，包括以下步骤：1)采用LB固体平板活化吡咯伯克霍尔德氏菌JK‑SH007菌种，获得单菌落，挑取单菌落进入LB液体培养基，180r/min，28℃纯培养24h，获得菌悬液；2)配制供试培养基TMG，在TSB培养基中加入1％v/v甘油和25mM MgSO4，pH 5‑7；3)将菌悬液1％v/v接种至TMG液体培养基，180r/min，28℃纯培养24h取出后静置4‑6天，形成生物膜。本发明配制了一种可诱导JK‑SH007形成生物膜的培养基TMG，JK‑SH007经过该培养基培养后，可形成肉眼可见的生物膜，使得其在营养匮乏的环境下更好的存活。
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公开(公告)号：CN109868255A
公开(公告)日：2019-06-11
申请号：CN201910207024.7
申请日：2019-03-18
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种促进拟茎点霉产生大量分生孢子的方法，包括：1)采用PDA培养基在固体平板上活化拟茎点霉菌种，获得到菌丝体；2)采用打孔法取步骤1)的菌丝体接种于装有PDA培养基的培养皿中，置于黑暗培养箱培养；3)待拟茎点霉菌丝长满整个培养基，成白色，絮状后，转移至黑光灯下或黑暗培养条件下，继续培养，产生大量分生孢子，总分生孢子产量不小于1.0×1011个/皿。本发明的促进拟茎点霉产生大量分生孢子的方法，以塑料培养皿结合黑光处理条件，使得培养皿可见明显的孢子堆，平均孢子堆数量达到109个/皿，每个孢子堆所含孢子数平均达到5.613×109个，且产生了大量乙型孢子，可生长速率远远大于以往拟茎点霉的产孢子方法，具有很好的实用性。
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