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公开(公告)号：CN104450675B
公开(公告)日：2017-11-21
申请号：CN201310452575.2
申请日：2013-09-25
Applicant: 中国林业科学研究院林业研究所
IPC: C12N15/10
Abstract: 本发明公开了一种从基因组DNA中获得侧翼序列的方法。该方法包括如下步骤：1）根据基因组DNA上的已知序列设计三条方向一致用于扩增侧翼序列的特异性引物，按距离侧翼序列由远及近的顺序将其依次记为GSP1、GSP2和GSP3；2）以基因组DNA为模板，以引物SAP（序列1‑15中任一）和所述GSP1进行第一轮PCR扩增，得到PCR产物1；3）以所述PCR产物1为模板，以引物SEP（序列16和17）和所述GSP2进行第二轮PCR扩增，得到PCR产物2；4）以所述PCR产物2为模板，以引物SNP（序列18）和所述GSP3进行第三轮PCR扩增，得到PCR产物3，从而获得所述侧翼序列。本发明所提供方法具有如下优点：操作简易、高特异性扩增、高成功率、容易得到大的片段、耗时短等。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104450675A
公开(公告)日：2015-03-25
申请号：CN201310452575.2
申请日：2013-09-25
Applicant: 中国林业科学研究院林业研究所
IPC: C12N15/10
Abstract: 本发明公开了一种从基因组DNA中获得侧翼序列的方法。该方法包括如下步骤：1）根据基因组DNA上的已知序列设计三条方向一致用于扩增侧翼序列的特异性引物，按距离侧翼序列由远及近的顺序将其依次记为GSP1、GSP2和GSP3；2）以基因组DNA为模板，以引物SAP（序列1-15中任一）和所述GSP1进行第一轮PCR扩增，得到PCR产物1；3）以所述PCR产物1为模板，以引物SEP（序列16和17）和所述GSP2进行第二轮PCR扩增，得到PCR产物2；4）以所述PCR产物2为模板，以引物SNP（序列18）和所述GSP3进行第三轮PCR扩增，得到PCR产物3，从而获得所述侧翼序列。本发明所提供方法具有如下优点：操作简易、高特异性扩增、高成功率、容易得到大的片段、耗时短等。
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公开(公告)号：CN104450770B
公开(公告)日：2017-08-15
申请号：CN201310452485.3
申请日：2013-09-25
Applicant: 中国林业科学研究院林业研究所
Abstract: 本发明公开了一种落叶松miR166a在调控植物发育中的应用。本发明所提供的应用具体为如下（1）‑（4）中任一所示的核酸分子在促进植物生长发育中的应用：（1）序列表中序列1所示的RNA分子；（2）序列表中序列2所示的RNA分子；（3）序列表中序列3所示的DNA分子；（4）序列表中序列3的第27‑539位所示的DNA分子。实验证明，LaMIR166a基因过表达的转基因植株在生根培养基a17上培养4个月时，有大量的侧根发生，且植株生长良好；而非转基因对照植株，只有主根伸长，没有侧根发生，且相比之下植株生长缓慢。这说明过表达miR166a可促进落叶松组培苗的生长速率、促进侧根的发生，从而提高其移栽成活率。
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公开(公告)号：CN104450770A
公开(公告)日：2015-03-25
申请号：CN201310452485.3
申请日：2013-09-25
Applicant: 中国林业科学研究院林业研究所
Abstract: 本发明公开了一种落叶松miR166a在调控植物发育中的应用。本发明所提供的应用具体为如下（1）-（4）中任一所示的核酸分子在促进植物生长发育中的应用：（1）序列表中序列1所示的RNA分子；（2）序列表中序列2所示的RNA分子；（3）序列表中序列3所示的DNA分子；（4）序列表中序列3的第27-539位所示的DNA分子。实验证明，LaMIR166a基因过表达的转基因植株在生根培养基a17上培养4个月时，有大量的侧根发生，且植株生长良好；而非转基因对照植株，只有主根伸长，没有侧根发生，且相比之下植株生长缓慢。这说明过表达miR166a可促进落叶松组培苗的生长速率、促进侧根的发生，从而提高其移栽成活率。
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公开(公告)号：CN106893737A
公开(公告)日：2017-06-27
申请号：CN201510953701.1
申请日：2015-12-17
Applicant: 中国林业科学研究院林业研究所
Abstract: 本发明公开了一种落叶松胚性细胞的遗传转化方法。本发明提供了一种落叶松胚性细胞的遗传转化方法，依次包括如下步骤：(a1)取落叶松胚性细胞，悬浮于重组农杆菌侵染液进行侵染；(a2)完成步骤(a1)后，收集落叶松胚性细胞，进行恢复培养；(a3)完成步骤(a2)后，取落叶松胚性细胞，采用抽滤脱菌装置进行脱菌。本发明提供的方法，可用于利用基因工程手段对落叶松进行快速定向遗传改良，为研究外源基因在落叶松体内表达调控及其功能验证和胚胎发育研究提供技术平台。
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公开(公告)号：CN106893737B
公开(公告)日：2020-04-21
申请号：CN201510953701.1
申请日：2015-12-17
Applicant: 中国林业科学研究院林业研究所
Abstract: 本发明公开了一种落叶松胚性细胞的遗传转化方法。本发明提供了一种落叶松胚性细胞的遗传转化方法，依次包括如下步骤：(a1)取落叶松胚性细胞，悬浮于重组农杆菌侵染液进行侵染；(a2)完成步骤(a1)后，收集落叶松胚性细胞，进行恢复培养；(a3)完成步骤(a2)后，取落叶松胚性细胞，采用抽滤脱菌装置进行脱菌。本发明提供的方法，可用于利用基因工程手段对落叶松进行快速定向遗传改良，为研究外源基因在落叶松体内表达调控及其功能验证和胚胎发育研究提供技术平台。
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