本发明提供一种离子色谱法测定羟甲基磷酸含量的方法，针对羟甲基磷酸标准样品进行离子色谱检测，拟合羟甲基磷酸标准样品的色谱图曲线；将合成得到的草甘膦样品中加入羟甲基磷酸标准液，用水定容，超声溶解得到检测液，进行离子色谱检测，建立羟甲基磷酸的色谱图，得到羟甲基磷酸的色谱峰保留时间；对照拟合的标准样品的色谱图曲线计算得到样品中的羟甲基磷酸含量；所述的进行离子色谱检测的条件为：色谱柱：Metrosep A Supp 5‑250/4.0；淋洗液：碳酸钠和氢氧化钠的混合溶液，进行等度洗脱。通过阴离子柱等度洗脱分离出峰较快，且峰型利落，检出限低，在较短内能快速准确地测出羟甲基磷酸的含量。