本发明涉及非洲猪瘟病毒EP1242L蛋白抗原表位及其应用，以非洲猪瘟病毒EP1242L蛋白的氨基酸序列为材料，通过T7噬菌体展示技术将包含截短的EP1242L蛋白序列展示其上，构成噬菌体展示文库，利用非洲猪瘟病毒感染猪阳性血清与上述T7噬菌体展示文库的免疫沉淀后测序，鉴定其为抗原优势表位，随后通过噬菌体文库与通过非洲猪瘟病毒感染猪阳性血清的生物淘选与单个噬菌斑挑取，获得展示如SEQ ID NO.1所示多肽序列的T7噬菌体，首次确定非洲猪瘟病毒EP1242L蛋白的T细胞抗原表位，该抗原表位的获得为以抗原表位为材料研发非洲猪瘟检测试剂及其试剂盒、单抗制备和安全、可鉴别诊断表位疫苗等急需战略防控产品奠定了基础。