本发明涉及多糖发酵工艺研究领域，具体涉及一种利用微生物发酵提取铁皮石斛多糖的方法，具体包括以下步骤：S1，水提法提取铁皮石斛多糖，经过离心取上清，并进行灭菌；S2，乳酸菌培养并计数，然后将乳酸菌接种到灭菌好的上清中，并进行单因素试验、响应面试验，发酵得到发酵液；S3，纯化石斛发酵多糖；S4，铁皮石斛发酵多糖分子量测定；S5，生物活性测定，本发明的有益效果是：选取温度、转速、时间、菌种接种量四个因素进行单因素实验，以DPPH清除率为评价指标，得到三个较优水平，进而设计四因素三水平的响应面试验，经过响应面试验分析得到铁皮石斛多糖发酵的最优条件为：温度39℃、时间48h、转速150r/min、菌种接种量3％。