本发明公开了一种尖孢镰刀菌古巴专化型孢子的检测装置及检测方法与应用。该检测装置包括玻璃底板、ITO玻璃电极和环状钨电极；电沉积时，玻璃底板、ITO玻璃电极和环状钨电极依次排布，在ITO玻璃电极的ITO层上设置有与环状钨电极形状一致的绝缘层；电检测时，电沉积制备得到的含有印迹聚合物的ITO玻璃电极置于玻璃底板和环状钨电极之间，印迹聚合物与环装钨电极连接。使用该检测装置，能制备得到超高位点密度尖孢镰刀菌古巴专化型孢子的印迹聚合物膜层，用于检测尖孢镰刀菌古巴专化型孢子，解决了印迹识别绝对值低的问题，使得光强累积到肉眼可辨别程度，肉眼荧光光强与标准色卡具有良好的对应关系。