本发明属于心脏芯片技术领域，尤其涉及一种多通量实时电监测心脏芯片及其制作方法，多通量实时电监测心脏芯片包括：由上至下依次固接的灌流层、培养室层和玻璃基底‑电极板；灌流层上开设有树状阶梯灌流通道，树状阶梯灌流通道包括沿液体流动方向依次连通设置的n级混合流道组，位于尾端的混合流道组的出液端分别连通有液体注入部的进液端，液体注入部的出液端连通有出口；培养室层上开设有若干培养部，若干培养部与若干液体注入部一一对应，培养部的进液端与液体注入部的中部连通；玻璃基底‑电极板上设置有若干电极部，若干电极部与若干培养部一一对应并连接，以及多通量实时电监测心脏芯片的制作方法。