本发明涉及一种铜绿假单胞菌噬菌体及其应用，属于微生物技术领域。本发明分离并鉴定了一种新的感染铜绿假单胞菌的裂解性噬菌体Pa_WF01，并对该噬菌体进行了生物学特性研究、形态学观察和全遗传进化关系分析，确定噬菌体Pa_WF01是无尾噬菌体Caudoviricetes纲Schitoviridae科Litunavirus属成员。本发明使用耐碳青霉烯铜绿假单胞菌CRPA感染的小鼠模型评价了噬菌体Pa_WF01的体内治疗效果和安全性，结果表明噬菌体Pa_WF01可用于治疗CRPA感染，缓解CRPA感染引起的炎症反应。另外，其与鲍曼不动杆菌噬菌体Ab_WF01组合可进一步促进抑菌效果。