本发明公开了一种二化螟唾液蛋白二硫键异构酶在提高烟草对草地贪夜蛾和蚜虫抗性中的应用及方法，属于农业科学技术领域。具体包括依据二化螟唾液蛋白组数据库，从二化螟基因组中找到该基因的编码区序列，构建到适用于植物表达的过表达载体中，并利用农杆菌菌液浸润叶片法获得瞬时过表达二硫键异构酶CsPDI的烟草植株。对其进行细胞死亡、ROS爆发、茉莉酸积累等抗虫性测定。结果表明：二硫键异构酶CsPDI在烟草中表达后能显著诱导植株细胞死亡、ROS爆发和茉莉酸积累等抗性反应，且正调控植株抗虫性。因此，可以通过导入该基因的方式培育抗性品种，对于植物育种具有重大的应用价值。