本发明提供了一种分泌抗环酯草醚单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检测领域。本发明分泌环酯草醚单克隆抗体的杂交瘤细胞株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，保藏日期2023年02月08日，保藏编号CGMCC No.45476。利用该细胞株分泌获得抗环酯草醚单克隆抗体用于进行食品安全检测中环酯草醚残留的分析检测。本发明获得的抗环酯草醚单克隆抗体细胞株可用于免疫分析检测，其对环酯草醚有较好的检测灵敏度和特异性(IC50值为10ng/mL)。本发明成果可用于制备环酯草醚的免疫检测试剂盒以及胶体金试纸条，为谷物、油料、蔬菜、糖料、烟草中环酯草醚残留量的检测提供有力的检测方法与手段。