本发明涉及布鲁氏菌检测技术领域，具体涉及一种基于荧光素酶亚基互补的布鲁氏菌Omp16抗体检测方法及应用，其融合抗原由LgBi T‑Omp16和SmBi T‑Omp16两种融合蛋白组成，能够与布鲁氏菌感染后形成的Omp16蛋白抗体的可变区结合，进而实现了对布鲁氏菌感染抗体的快速检测。本发明的荧光素酶亚基互补融合抗原具备卓越的特异性和高灵敏度，其在底物的催化下，在特定波长下能够发光,这种发光现象使得抗体的检测诊断过程变得高效而快速。通过与布鲁氏菌感染相关的Omp16蛋白抗体的可变区结合，本发明实现了对抗体的快速、特异性、高灵敏度的检测，为布鲁氏菌感染的快速检测提供了一种创新而可靠的解决方案。