本发明公开了一种用于数字PCR同时检测四种念珠菌的引物探针组合、试剂盒以及检测方法，属于生物检测技术领域。所述引物探针组合包括检测白色念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、近平滑念珠菌的四种特异性引物探针组合。本申请通过实验优化，解决了多重引物扩增体系互相干扰的问题，通过比对大量序列，设计实验，报证了检测上述四种念珠菌引物探针的特异性等优越特点。实验表明，本申请的引物探针组、试剂盒和检测方法能提供更加精准的定性、定量的数据结果，能够更加准确的为患者提供更加精准的术后跟踪与用药指导。