本发明涉及一种CAR‑iNK细胞及其制备方法与应用。所述CAR包含scFv、跨膜结构域、共刺激结构域和信号传导域，所述scFv包含人源化FMC63的VH和VL，所述信号传导域经IL15RF修饰。本发明通过将CAR结构以及能够增加NK增殖和持久性的元件同时转导到iPSC中，得到的CAR‑iPSC可以无限扩增，因此能够满足CAR‑iNK现货的要求。同时，通过本发明的方法分化得到的高纯度CAR‑iNK细胞表现出显著的体外特异性杀伤功能和明显的体内药效。