本发明提供了一种ac4C乙酰化修饰调控RNA剪接的方法，通过构建乙酰化修饰的RNA，设计了标记的特异RNA探针，将RNA探针与待测RNA基因特异性结合，形成双链RNA，杂交双链进行变性聚丙酰胺凝胶电泳，通过磷屏成像系统检测被保护的探针的信号，从而定量分析ac4C修饰对RNA剪接的影响。该方法操作简单，灵敏度高，通过改变乙酰化酶NAT10的表达或者使用ac4C位点突变病毒，能够定量反映ac4C乙酰化修饰调控RNA剪接的水平。