本发明公开了一种三维细胞表位制备胶体金试纸加工设备及方法，属于胶体金试纸加工技术领域。一种三维细胞表位制备胶体金试纸加工设备，包括加工台，还包括：安装轴，设置在加工台上，所述安装轴上设有制备胶体金试纸的原材料；限位夹板，设置在加工台上，制备胶体金试纸的原材料穿过限位夹板；吸盘，设置在限位夹板上；转轴，转动连接在加工台上，所述转轴上设有压辊；拨正块，呈圆周分布的设置在转轴上；切割部，设置在加工台上；胶体金试纸包括底板、NC膜、吸水纸、样品垫、金标垫；本发明可以根据底板长度准确粘贴吸水纸、金标垫、样品垫，避免材料浪费。