本发明涉及一种山慈菇中二酸苄酯苷类和芪类化合物的提取方法及其应用。本发明以高效液相色谱法测定山慈菇中dactylorhin A、militarine，山药素III含量和提取率为考察指标，对乙醇浓度、提取时间、提取温度、料液比进行单因素实验，采用Box‑Behnken响应面法设计，再以综合评分为指标，优化山慈菇的回流提取工艺，并对优化后的提取工艺进行验证。同时，运用Cell Counting Kit‑8法观察山慈菇乙醇提取物处理对乳腺癌MDA‑MB‑231细胞生长增殖的影响。通过抗氧化活性研究可得，不同浓度的乙醇提取物均有一定的抗氧化活性。不同浓度的山慈菇乙醇提取物处理乳腺癌细胞后，对细胞增殖具有较好的抑制效果。同时，通过萃取得到的部位化合物，发现山慈菇的石油醚部位对细胞增殖具有较好的抑制效果。