本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种抗人腺病毒中和抗体及其制备方法和应用。该中和抗体，其重链可变区包含如下所示的VH‑CDR1、VH‑CDR2和VH‑CDR3：VH‑CDR1如SEQ ID NO.13所示，VH‑CDR2如SEQ ID NO.14所示，VH‑CDR3如SEQ ID NO.15所示；以及，其轻链可变区包含如下所示的VL‑CDR1、VL‑CDR2和VL‑CDR3：VL‑CDR1如SEQ ID NO.16所示，VL‑CDR2如SEQ ID NO.17所示，VL‑CDR3如SEQ ID NO.18所示，能与HAdV‑B7、HAdV‑B55和HAdV‑B11均具有较高的亲和力和中和活性。