本发明涉及免疫分析技术领域，提供了一种多菌灵半抗原、抗原、抗体及制备方法和应用。本发明在多菌灵的苯环位置引入活性基团，所得多菌灵半抗原和载体蛋白偶联后，能够将多菌灵的氨基甲酸酯基团充分暴露在载体蛋白之外，增强了抗原的免疫原性，经宿主动物免疫后，能够产生效价高、灵敏度高的抗体，从而提高多菌灵分析检测的准确性。实施例结果表明，本发明的多菌灵抗原经小鼠注射免疫后，产生的抗体效价为1.0×105，半抑制浓度(IC50)为1ppb左右，胶体金对干烟叶样品中多菌灵的最低检测限为50ng/g。