本发明公开一种利用打浆预处理制备阳离子‑酶活测试纸的方法。包括如下步骤：(1)将用水润湿后的纸浆浆板在1‑8wt％的浓度下疏解分散得到疏解纸浆Ⅰ；(2)将疏解纸浆Ⅰ调节浓度为3‑18wt％，加入到PFI磨浆机中进行打浆预处理，得到打浆预处理纸浆Ⅰ；(3)将氢氧化钠溶液和(3‑氯‑2‑羟丙基)三甲基氯化铵溶液在室温下混合搅拌得到混合溶液Ⅰ；(4)调节打浆预处理纸浆Ⅰ的浓度为1‑15wt％，加入混合溶液Ⅰ，得到阳离子纸浆纤维Ⅰ；(5)将阳离子纸浆纤维Ⅰ、疏解纸浆Ⅰ、湿强剂混合搅拌，随后抄造，干燥后得到阳离子‑酶活测试纸页。本发明方法具有工艺简单、成本低、环保、适用性高和酶活性检测效果好等优点。