本发明属于异戊二烯生产技术领域，公开了固定化酶外场强化MVA下游途径发酵生产异戊二烯的方法。该方法以葡萄糖为原料，经MVA途径，在大肠杆菌Escherichia coli体内发酵过程中，加入用甲羟戊酸激酶、磷酸甲羟戊酸激酶、二磷酸甲羟戊酸脱羧酶、异戊烯基二磷酸异构酶和异戊二烯合成酶得到的五酶固定化酶PEGDGE‑NSBA‑15@MVK‑PMK‑MVD‑IDI‑ISPS进行外场强化，生产得到异戊二烯。该方法消耗发酵过程中积累的MVA，促进反应进行，从而提高异戊二烯的产量，同时还能实现固定化酶的重复利用。