本发明公开了一种猫杯状病毒假病毒的制备方法，先通过PCR扩增获得gp2基因，然后采用BP反应构建得到含有gp2基因序列的入门克隆载体pDown‑{FCV‑gp2}，接着采用LR反应将携带启动子的pUp‑EF1A载体、pDown‑{FCV‑gp2}以及pLV.Des2d.C/EGFP:T2A:Puro重组，得到重组表达载体pLV[Exp]‑EGFP:T2A:Puro‑EF1A>{FCV‑gp2}，将其和慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞，即得。该方法制备得到的猫杯状病毒假病毒无复制活性,生物安全性高,能够为猫杯状病毒的研究、抗病毒制剂和疫苗评价提供强有力的筛选工具,具备广泛的应用价值。