本发明属于生物技术领域，具体涉及九组分抗原非洲猪瘟重组腺病毒疫苗。本发明首先提供了一种由非洲猪瘟病毒抗原P34蛋白、P30蛋白、P54蛋白、A104R蛋白、X蛋白、E165R蛋白、C129R蛋白、P72蛋白和Y蛋白组成的九组分抗原非洲猪瘟重组腺病毒组合，其中将至少一种抗原或其抗原表位的编码基因插入腺病毒骨架载体构建为表达所述抗原或其抗原表位的重组腺病毒；所述九组分抗原非洲猪瘟重组腺病毒组合能够产生较强的免疫反应；制备的九组分抗原非洲猪瘟重组腺病毒疫苗对亲本非洲猪瘟强毒株攻毒具有良好的免疫保护力，无生物安全风险；且所述九组分抗原非洲猪瘟重组腺病毒疫苗与九组分亚单位疫苗联合具有更好的免疫保护效力。