本发明提供了一种烟草落黄调控基因NtRALF08、蛋白、多肽、落黄促进剂、制备方法及应用。本申请首次发现NtRALF08基因参与、调控烟草衰老落黄，且分析结果表明由NtRALF08基因人工合成的NtRALF08多肽以及制备的烟草落黄促进剂均能够促进烟草衰老落黄，应用效果显著，具有生物安全性。同时，本申请中的烟草落黄调控多肽可以通过人工大批量合成，且合成方便、获取便利。烟草落黄促进剂的制备和使用方法简单，可操作性强，可以大面积促进烟叶落黄、调控烟叶落黄时间。