本发明提供了一种用于PCR‑反向斑点杂交技术检测血流感染真菌病原体的探针，包括十三种氨基标记特异性杂交探针，序列如SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：13所示，且5’端标记有氨基。本发明提供了一种用于PCR‑反向斑点杂交技术检测血流感染真菌病原体的引物，包括通用‑F和通用‑R，序列分别如SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17所示，且5’端分别标记有生物素。本发明还提供了一种PCR‑反向斑点杂交技术检测血流感染真菌病原体的试剂以及基于PCR‑反向斑点杂交技术检测真菌病原体的方法。本发明可实现十三种真菌病原体的快速、准确检测，适用于真菌血流感染患者的早期便捷式诊断。