本发明涉及一种抗HBP单克隆抗体的制备方法、单克隆抗体及应用。本发明以HBP真核重组蛋白作为免疫原，通过免疫兔子，对兔子的PBMC进行细胞分选，获取特异性结合免疫原的细胞，然后对抗体进行基因扩增获取抗体的轻重链基因序列，通过后续的细胞重组表达获取高纯度和高亲和力的单克隆抗体。本发明涉及的单克隆抗体作为诊断用的重要原料，可以特异性结合天然样本中的HBP蛋白，具有较高的临床符合率，对于临床细菌性感染性疾病的早期诊断与治疗具有重要指示意义。