本发明涉及生物技术领域，具体涉及检测常见病原微生物及耐药基因的试剂盒及检测方法。该试剂盒，包括反转录体系、第一轮扩增体系、第二轮扩增体系、阳性质控品和阴性质控品，所述第一轮扩增体系包括引物库，所述引物库中的引物的Tm值保持为60±5℃，扩增子长度为100～200bp，引物长度为15～25，GC含量为40～65％，所述引物的3’末端进行RNA碱基修饰和3’末端Spacer C3修饰。该试剂盒对引物的3’末端进行RNA碱基修饰和3’末端Spacer C3修饰，避免引物之间形成二聚体，实现DNA和RNA的共同测定。