本发明公开了一种山药离体茎段EMS诱变创制山药突变体的方法。所述方法包括茎枝选择、茎段规格、EMS诱变处理方法，以及利用EMS处理过的茎段培养再生苗、移栽并收获M1代山药EMS突变体。通过本发明可以获得叶片性状变异的多种突变体，有效解决山药无性繁殖存在的遗传背景狭窄、变异少等技术瓶颈；利用离体茎段EMS诱变，解决了所有山药资源类型(包括不结零余子的山药)诱变部位选择的技术难题；明确了离体茎段部位、规格及诱变方法，有针对性地提高了EMS诱变变异率；当年培育成M1代种薯，解决了山药种质创制周期长、成本高和效率低的问题，为山药新品种选育提供技术支撑。